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糞便鈣衛蛋白試劑盒如何檢測雙抗體呢?

2020-08-14 瀏覽次數:1593

   糞便鈣衛蛋白是診斷腸炎疾病嚴重性的一個指標,腸炎性疾病(IBD)患者的糞便鈣衛蛋白濃度高,其疾病復發的風險增大。低糞便鈣衛蛋白濃度與腸的同種異體移植排斥的低風險相關。該檢測使用特異性單克隆抗體,確保測試只檢測到鈣衛蛋白。因此糞便鈣衛蛋白試劑盒是比不可少的。
  糞便鈣衛蛋白試劑盒用于檢測雙抗體步驟:
  (1) 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,CALPRO試劑盒,糞便鈣衛蛋白試劑盒棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
  (2) 加樣:CALPRO試劑盒,糞便鈣衛蛋白試劑盒加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
  (3) 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
  (4) 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
  (5) 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
  (6) 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,CALPRO試劑盒,糞便鈣衛蛋白試劑盒以空白對照孔調零后測各孔O?D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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